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篩選藥物是確定藥物效用*的一步,要知道抗癌藥物或抗體藥物偶聯(lián)物篩選測定是確立藥物候選物在殺死癌細(xì)胞中的效用的步。然而,整個(gè)過程的藥物篩選測定是耗時(shí)和繁瑣的。這篇文章的目的是使體外篩選測定更容易。
簡單來說,篩選藥物可被分解為3步。
步:細(xì)胞培養(yǎng)(plate 1)
. 仔細(xì)選擇目標(biāo)細(xì)胞,來測試化合物的功效。通常,選擇癌細(xì)胞系(組織特異性腫瘤類,耐藥/敏感性癌癥)用于藥物篩選。
. 使用96孔板,覆蓋廣泛的濃度范圍。
. 在200μl培養(yǎng)基/孔中保持鋪板密度為5000-20,000個(gè)細(xì)胞。密度將取決于細(xì)胞生長和孵育時(shí)間(24,48或72小時(shí))。準(zhǔn)備大量的細(xì)胞稀釋液。
. 一個(gè)96孔板可以測定兩類藥物(藥物1:行A-D,列2-12;藥物2:行E-H,列2-12)中的兩種藥物的測試。
第二步:藥物稀釋 (plate 2)
. 這一步需要計(jì)算。你需要決定化合物的測試范圍。這通?;谂c化合物的抗癌效率/毒性范圍相關(guān)的先前報(bào)道。如果你是個(gè)測試者,簡單地測試3個(gè)濃度范圍(如100μM,10μM和1μM)。
. 一旦你知道原始濃度范圍,決定目標(biāo)細(xì)胞能承受的濃度。將該濃度乘以2,即是工作濃度。
第三步:藥物與細(xì)胞融合
. 棄掉Plate 1的整個(gè)培養(yǎng)基。使用多通道移液槍,將95ul新鮮培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到Plate 1的每個(gè)孔中。然后,將95ul上述藥物稀釋物從Plate 2轉(zhuǎn)移到Plate 1相同(對應(yīng))的孔中。這時(shí)的陰性對照為:A1,B1,C1,D1;陽性(無藥物)對照為:E1,F(xiàn)1,G1,H1。孵育細(xì)胞。
. 一旦孵育完成,使用任何細(xì)胞活力/細(xì)胞毒性分析來測試候選藥物。