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乙酸激酶檢測(cè)試劑盒使用詳情!

發(fā)布時(shí)間: 2019-12-17  點(diǎn)擊次數(shù): 892次

乙酸激酶檢測(cè)試劑盒使用詳情!

 

產(chǎn)品說明:

ACK 廣泛存在于生物體內(nèi),催化乙酸和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP,是細(xì)菌碳代謝和能量代謝的關(guān)鍵酶,尤其 在古細(xì)菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。

測(cè)定原理如下:(1ACK 催化乙酸鈉和 ATP 生成乙酰磷酸和 ADP,(2)丙酮酸激酶催化 ADP PEP 生成 ATP和丙酮酸,(3)乳酸脫氫酶催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+,(4)在 340nm 下測(cè)定 NADH 氧化生成 NAD+率,即可反映 ACK 活性。

 

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量石英比色皿/ 96 UV 板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、 冰、蒸餾水。

 

操作步驟:

一、樣品處理:

1、細(xì)菌或細(xì)胞處理:

收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或 胞(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),15000g,4℃,離心 20 分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織處理:

稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿;15000g ,4℃,離心 20 分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。

3、血清(漿):直接檢測(cè)。

 

二、測(cè)定步驟:

1、 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。2、 將試劑一于 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)保溫 15min。

 

注意事項(xiàng):

1、測(cè)定過程中樣本和所有試劑在冰上放置,以免變性和失活。

2、反應(yīng)液的溫度必須保持 37℃或 25℃,比色皿測(cè)定時(shí)可取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水,將此燒放入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。

3、吸光值大于 1 時(shí),建議稀釋后測(cè)量,注意計(jì)算公式乘以稀釋倍數(shù);吸光值小于 0.01 時(shí),建議延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間測(cè)量,注意計(jì)算公式變化。

 

乙酸激酶檢測(cè)試劑盒使用詳情!

 

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