谷氨酸合成酶(GOGAT)檢測試劑盒測定意義

產(chǎn)品說明：
GOGAT 主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非綠色組織的前質(zhì)體中，和谷氨酰胺合成酶（GS）共同構(gòu)成 GS/GOGAT 循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。GOGAT 以 NADH 為電子供體，催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸形成兩分子的谷氨酸，NADH 在 340nm 吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。

測定意義：GOGAT分布于植物中，和谷氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán)，參與氨同化的調(diào)控。
測定原理：GOGAT催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，形成兩分子的谷氨酸；同時NADH氧化生成NAD+，340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
 

試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
 

操作步驟：
一、粗酶液提?。杭毦蚺囵B(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1mL 提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
 

二、測定步驟：
1、紫外分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液提前配置，平衡至室溫。

注意事項：
1、測定期間樣本在冰上放置，以免變性和失活。
2、盡量兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3、當(dāng) A1 大于 1.5 或者?A 大于 0.6 時，建議將樣品用蒸餾水稀釋后測定，當(dāng)?A 過小時，可以延長酶促反應(yīng)時間（10min 或 15min）或者加大加入的樣品體積進行測量。
4、由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約 1mg/mL），所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量

谷氨酸合成酶(GOGAT)檢測試劑盒測定意義