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脂多糖(來(lái)源于大腸桿菌)使用方法
簡(jiǎn)介:脂多糖,英文名稱(chēng)Lipopolysaccharides,簡(jiǎn)稱(chēng)LPS,是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種*成分,位于細(xì)胞壁的外層并暴露于非莢膜細(xì)菌的細(xì)胞表面,有利于維持細(xì)胞外膜的完整性,保護(hù)細(xì)菌免受膽汁鹽和脂類(lèi)抗生素的破壞。結(jié)構(gòu)上,脂多糖由類(lèi)脂A、核心多糖和O-多糖側(cè)鏈組成。其中類(lèi)脂質(zhì)A是構(gòu)成細(xì)菌內(nèi)毒素的主要成分,決定其毒性強(qiáng)弱;而O-多糖側(cè)鏈在不同細(xì)菌間是高度變化的,特異性決定細(xì)菌的血清型。
LPS可以引起免疫刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動(dòng),包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致末梢血管虛脫。常通過(guò)檢測(cè)LPS的存在來(lái)診斷腦膜炎。正是LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系,生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究,如闡明LPS的結(jié)構(gòu),代謝,免疫學(xué),生理學(xué),毒性,生物合成途徑;誘導(dǎo)生長(zhǎng)促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌;誘導(dǎo)疾病研究的動(dòng)物模型如炎癥反應(yīng),急性肺損傷。將LPS分別與FITC、TRITC或2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBSA)反應(yīng)即可得到FITC、TRITC或TNP標(biāo)記的LPS,主要用于非胸腺依賴(lài)性B細(xì)胞對(duì)細(xì)菌LPS的免疫應(yīng)答研究。
使用方法
1.配制儲(chǔ)存液(用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)):將1mg LPS重懸于1mL無(wú)菌平衡鹽溶液或細(xì)胞培養(yǎng)基,輕微旋渦振蕩直至粉末*溶解,即得到1mg/ml的儲(chǔ)存液。此儲(chǔ)存液可進(jìn)一步用無(wú)菌平衡鹽或細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至需要的工作濃度。
2.儲(chǔ)存液的保存:本儲(chǔ)存液(1mg/ml)可放在4℃保存,約一個(gè)月穩(wěn)定;也可分裝成單次用量后放到-20℃,2年穩(wěn)定。避免反復(fù)凍融。
配制注意:LPS溶液應(yīng)儲(chǔ)存于硅烷化容器內(nèi),因?yàn)長(zhǎng)PS可吸附于塑料或某些玻璃器皿,尤其當(dāng)其濃度<0.1mg/ml時(shí)。但當(dāng)LPS濃度大于1mg/ml時(shí),上述吸附則可忽略不計(jì)。如使用玻璃器皿,則需旋渦振蕩LPS溶液至少30min,以重溶被吸附溶質(zhì)。
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