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D-熒光素鉀鹽是螢火蟲熒光素酶底物

發(fā)布時間: 2022-06-09  點擊次數(shù): 779次

D-熒光素鉀鹽是螢火蟲熒光素酶底物


D-熒光素( D-Luciferin)是螢火蟲熒光素酶底物,其量子效率為 0.88,是魯米諾(Luminol)的 20 倍。D-熒光素(D-Luciferin)是熒光素酶 (Luciferase)的常用底物,普遍應(yīng)用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域,特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機制是在 ATP 和熒光素酶的作用下,熒光素(底 物)能夠被氧化發(fā)光。當(dāng)熒光素過量時,產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性。將攜帶熒光素酶編碼基因(Luc)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞 后,導(dǎo)入研究動物如大、小鼠體內(nèi),之后注入熒光素,通過生物發(fā)光成像技術(shù)(BLI)來檢測光強度變化,從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)或藥物 的治療功效等。也可以利用 ATP 對此反應(yīng)體系的影響,根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。D-熒光素也常用于體外研究,包括 熒光素酶和 ATP 水平分析;報告基因分析;高通量測序和各種污染檢測。 

使用方法

1. 活體成像分析方法 


A:用 DPBS(w/o Mg2+、Ca2+)配置 D-Luciferin 工作液(15mg/mL),0.2 μm 濾膜 無菌過濾。立即使用,或 分裝-20℃保存。 


B:注射量:10μL/g 的體重,如 10g 重小鼠,注射 100μL 工作液(1.5mg D-Luciferin)。 


C:腹腔注射 10~15 分鐘后,上機進(jìn)行圖像分析。


 *建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力曲線,從而確定高信號檢測時間和信號平臺期。


2. 體外分析方法 A:用無菌水配置 200×的 D-Luciferin 儲備液(30mg/mL),立即使用,或分裝-20℃保存。 


B:用預(yù)熱好的*培養(yǎng)基稀釋 D-Luciferin 儲備液,配置工作液(150μg/mL)。 


C:去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。 


D:進(jìn)行圖像分析前,向細(xì)胞內(nèi)添加熒光素工作液,37℃孵育 5-10 min,進(jìn)行圖像分析。 


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