Hoechst 33258活細胞和固定的細胞均可標記

Hoechst 33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強烈的藍色熒光，對細胞的毒性較低，常被稱為DNA探針。實驗研究中Hoechst 33258常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測，也可以用于普通的細胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。活細胞和固定的細胞均可標記。

使用方法

配制儲存液

用水配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。染色工作濃度0.5-10μg/ml。

A：固定的細胞或組織染色

免疫熒光染色完畢后按后續(xù)步驟進行Hoechst33258細胞核染色。如果不進行其它染色，則直接按后續(xù)步驟進行Hoechst33258細胞核染色。

1) 對于貼壁細胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258工作液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

2) 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。 

3) 封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長460nm。

B：活細胞或組織染色

1) 細胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液，對于96孔板一個孔需加入100μl染色液。     

2) 在 37℃培養(yǎng)細胞 10～20 分鐘。

3) 用 PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

4) 封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350nm，發(fā)射波長460nm。

儲存溫度：-20℃避光