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膠原酶NB4/Collagenase NB 4使用詳情
產(chǎn)品描述
膠原酶(Collagenase,CAS NO. 9001-12-1)是一種蛋白水解酶,常用來(lái)消化細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。作為一種肽鏈內(nèi)切酶,膠原酶特異性識(shí)別Pro-X-Gly-Pro序列(高頻出現(xiàn)在膠原蛋白,很少在其他蛋白中發(fā)現(xiàn))并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之間的肽鍵。不同于其他蛋白酶,膠原酶是唯-一一種可識(shí)別并降解具三股超螺旋結(jié)構(gòu)的天然膠原纖維,這種膠原纖維廣泛存在結(jié)締組織中。
膠原酶NB4標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別(Collagenase NB 4 Standard Grade),來(lái)源于溶組織梭菌(Clostridium histolyticum),是一種粗制的膠原酶,含有膠原溶解酶和其他酶活性包括梭菌蛋白酶和中性蛋白酶,這些酶比例的平衡確保溫和和有效的組織消化。本品膠原酶活性≥0.10 U/mg(PZ),適用于人和動(dòng)物組織各種細(xì)胞的分離,組織類型包括:脂肪組織、軟骨、皮膚、胎盤(pán)、臍帶組織和肺,還適用于細(xì)胞傳代培養(yǎng),比如胚胎干細(xì)胞。
保存與運(yùn)輸方法
保存:2-8℃干燥保存,至少1年有效。
運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。
使用方法
一、儲(chǔ)存液制備
膠原酶NB4標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別溶于所有緩沖液(通常用于細(xì)胞分離)的濃度高達(dá)150mg/ml。酶溶液需連續(xù)放在冰上。由于膠原酶和一些二級(jí)蛋白酶依賴于Ca2+,因此建議在緩沖液內(nèi)加入≥2mM Ca2+,且完-全不能含鈣離子螯合劑(比如EDTA)。
重溶的膠原酶NB4溶液需經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌,按照單次用量分裝,并置于-20℃凍存。如果避免反復(fù)凍融,可穩(wěn)定保存1年。注意經(jīng)0.22μm濾膜建議選擇具低蛋白結(jié)合特性的膜(比如,醋酸纖維素,PVDF,或PES)。
二、工作液制備
用緩沖液稀釋儲(chǔ)存液到需要的膠原酶濃度,工作液需一直保存在冰上直到使用。
三、組織消化
對(duì)以下應(yīng)用的建議起始濃度:脂肪組織(人或鼠類)—0.2-0.3 PZ U/ml;軟骨(人或鼠類)—0.3-0.4 PZ U/ml;總的來(lái)說(shuō),具體膠原酶濃度取決于組織類型、來(lái)源和分離步驟。本膠原酶的最佳條件為37℃,pH 7.4。
四、失活和抑制劑
比如,通過(guò)降低反應(yīng)溫度或稀釋酶溶液能夠減低消化水平。
高pH能可逆失活膠原酶活性,低pH不可逆失活膠原酶活性。抑制劑包括半胱氨酸或螯合劑如EDTA。