乙酸激酶（ACK）活性檢測試劑盒操作原理

產(chǎn)品說明：
ACK廣泛存在于生物體內(nèi)，催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP，是細菌碳代謝和能量代謝的關鍵酶，尤其
是在古細菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。
測定原理如下：（1）ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸，（3）乳酸脫氫酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+，（4）在340nm下測定NADH氧化生成NAD+
速率，即可反映ACK活性。
注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者
增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
臺式離心機、紫外分光光度計、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌或細胞處理：
收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或
細胞（功率 20%，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復 30 次），15000g，4℃，離心 20 分鐘，取上清，置冰上待測。
2、組織處理：
稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿；15000g，4℃，離心 20 分鐘，取上清，置冰上待測
3、血清（漿）：直接檢測。
二、測定步驟
1、 紫外分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）保溫15min。

注意事項：
1、 測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。
2、 比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入
37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
3、 ΔA大于1時，建議稀釋后測量，注意計算公式乘以稀釋倍數(shù)；ΔA小于0.01時，建議延長反應時間測量，注意
計算公式變化