NP40裂解液制備樣本的小妙招

NP-40 裂解液是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等。本產(chǎn)品可以用于動(dòng)物、植物的細(xì)胞或組織樣品，也可以用于真菌或細(xì)菌樣品。NP-40 裂解液的主要成分為 Tris(pH7.4)，NaCl，1% NP-40，EDTA 以及磷酸酶抑制劑。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用普利萊P1511 BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

儲(chǔ)存：

4℃保存，12 個(gè)月有效

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物：

1. 800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，而后用預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞兩次。估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV）；

2. 每50～100 ml PCV加入5倍體積裂解液（250~500 ml）,渦旋震蕩10秒，冰浴放置20分鐘；

3. 12000g 4℃離心15分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。

制備組織裂解產(chǎn)物：

1. 取50-100 mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2. 按照每20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，渦旋震蕩10秒，冰浴放置20分鐘；

4. 12000g 4℃離心15分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物，可用于后續(xù)的免疫沉淀或者Western Blot等實(shí)驗(yàn)。

注意：

1. 在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3. 在該裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇進(jìn)行添加。