植物過氧化氫染色液(DAB法)適合什么樣本

植物組織在脅迫環(huán)境條件下會(huì)產(chǎn)生多種活性氧（ROS），ROS活性非常大且極其不穩(wěn)定，因此ROS的檢測(cè)通常因其最終產(chǎn)物而定。過氧化氫是活性氧的一種。在過氧化氫酶的催化下，過氧化氫能與DAB（3,3-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽）迅速反應(yīng)生成棕紅色化合物，從而定位組織中的過氧化氫，根據(jù)基本原理也稱其為DAB法。本產(chǎn)品就是基于以上原理，用于植物活組織中的過氧化氫染色。一般應(yīng)用于較嫩的根尖、葉片等的整體染色，染色后有過氧化氫聚集的部位呈棕色至深棕色。

使用方法

1. 試劑準(zhǔn)備：將100 mg DAB以磷酸緩沖液100 mL充分溶解，得到DAB染色工作液，避光4℃保存，一周內(nèi)有效。注：DAB對(duì)光敏感，溶解過程需要避光，如果較難溶解，可通過超聲、磁力攪拌等方法促進(jìn)溶解。
2. 采集經(jīng)脅迫（例如重金屬）的植物幼苗或根尖，純水稍洗凈，置于濾紙上吸干多余的水分。將植物幼苗或根尖浸沒在DAB染色工作染液中，常溫避光染色2-6 h，至陽(yáng)性部位出現(xiàn)深棕色，其余部位近無色或者呈植物本身的顏色即可。（根據(jù)植物幼嫩程度、顯色程度調(diào)整染色時(shí)間）
3. 用鑷子將植株幼苗或者葉片小心取出，浸入純水中來回漂洗3-5次，置于濾紙上吸干多余水分后，浸入95%乙醇中40℃處理3-16 h，目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素，脫色期間可多次更換新鮮的95%乙醇。
4. 用鑷子取出植株幼苗或者葉片，浸入純水中來回漂洗3-5次，置于濾紙上吸干多余水分后，將樣本轉(zhuǎn)入適量DAB樣本保存液中浸泡30 min，隨后可取出拍照。樣本可置于該保存液中常溫保存一周。

注意事項(xiàng)

1. DAB染色工作液配制好以后需4℃避光保存，一周內(nèi)使用。存放時(shí)間過久，會(huì)影響顯色。
2. 因過氧化氫容易分解，且任何外在因素都可能刺激植物應(yīng)激產(chǎn)生過氧化氫，因此植物樣本需要新鮮采集，并盡快完成染色。建議做陰性及陽(yáng)性空白對(duì)照組。
3. 樣本染色完成后盡快拍照保存結(jié)果。
4. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。