小牛腸堿性磷酸酶產(chǎn)品簡(jiǎn)介

中文名堿性磷酸酶，可將DNA、RNA的5’端磷酸基團(tuán)去除，常用于阻止載體的自連作用：在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，DNA連接酶催化DNA連接時(shí)需要有磷酸基團(tuán)的存在，載體在經(jīng)酶切后會(huì)在切點(diǎn)端保留一個(gè)磷酸基團(tuán)。而載體經(jīng)堿性磷酸酶去磷酸化后因5’端無(wú)磷酸基團(tuán)，因而不可以和自身3’端連接。因此連接反應(yīng)中載體本身會(huì)優(yōu)先發(fā)生的連接反應(yīng)被阻止，提高了目的片段插入率。另外，堿性磷酸酶還可制備用于5’端標(biāo)記的DNA模板，以及用于該酶蛋白的脫磷酸作用等。

本品為小牛腸來(lái)源的堿性磷酸酶，可以降解幾乎所有磷酸單酯，但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。

來(lái)源（Source）

攜帶小牛腸堿性磷酸酶表達(dá)質(zhì)粒的酵母

質(zhì)量控制（Quality Control）

無(wú)核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶、核糖核酸酶污染

熱滅活（Thermal Inactivation）

在螯合劑存在下，65℃加熱30 min，99%活性不可逆喪失；使用苯酚，可使酶完-全失活。

儲(chǔ)存液條件（Storage   conditions）

10 mM Tris-HCl（pH8.0），1 mM MgCl2，50 mM KCl，0.1 mM   ZnCl2，50% glycerol.

活性定義（Unit definition）

在pH9.8，37℃條件下，以對(duì)硝基苯酚磷酸鹽（p-nitrophenylphosphate）為底物，1分鐘生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的堿性磷酸酶量定義為1個(gè)活力單位。

最佳pH（Optimal pH）

該酶在底物濃度高的情況下其最佳反應(yīng)pH為10，在底物濃度低時(shí)，最佳pH為8，此時(shí)該酶活性較高濃度底物時(shí)稍低。

優(yōu)化體系（Optimal Buffer）

AP Buffer（500 mM Tris-HCl pH9.0，10 mM   MgCl2）