RT-PCR實驗檢測的服務內容

服務內容：

1.制定個性化實驗方案：根據(jù)不同的實驗目的確定實驗方案、選定合適的內參；
2.檢測類別：mRNA、miRNA、lncRNA、DNA；
3.樣本抽提及質檢：對客戶提供樣本進行RNA抽提，并利用NanoDrop進行樣本質檢；
4.定量PCR預實驗：包括樣本反轉錄為CDNA、配置PCR反應體系及進行Real-TimePCR反應；
5.正式定量PCR實驗：根據(jù)預實驗結果進行正式實驗；
6.數(shù)據(jù)分析：采用2- △△CT法進行分析，比較不同樣本間差異。

服務要求：
1.請?zhí)峁┙M織樣本，細胞樣本，血漿或血清樣本，totalRNA；
2.請?zhí)峁┮阎娜L基因序列或GeneBank號；
3.請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA來源、基因豐度等。

結果內容：整理好的報告，樣本收到之日起5個工作日內反饋質檢結果。

結果展示：

溶解曲線：

擴增曲線

數(shù)據(jù)統(tǒng)計

每個指標有2張圖。一張是擴增曲線，另一張是熔解曲線，用來證明PCR擴增中無非特異性擴增

送樣運輸要求：

1. 樣品處理

a. 動物組織：常規(guī)組織，脂肪組織，結締組織，纖維化組織適當增加。將組織剪切成合適大小后（建議組織塊長寬高均不大于0.5 cm），然后迅速浸泡于5～10倍體積的RNAsolidTM試劑中。（注意：已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經平衡一段時間后，可從溶液中取出，切成更小的組織塊，再重新放回RNAsolidTM試劑中；有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等，不適合用RNAsolidTM試劑進行RNA保護。）

b.植物組織：新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉，嫩莖組織切成合適的大小（建議長寬高均不大于0.5 cm）后，然后迅速浸泡于5～10倍體積的RNAsolidTM試劑中。（注意：某些植物組織天生具有的屏障，如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透，對于此類組織，通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。）

c.細胞等樣本：收集不小于10^6個細胞的沉淀（用PBS清洗1-2次）。之后迅速加入5～10倍體積的RNAsolidTM試劑。

d.酵母、細菌等樣本：離心棄上清，收集小米粒大小的單菌體沉淀，然后迅速加入適量的RNAsolidTM試劑浸沒菌體沉淀。

e. RNA樣品： OD260/280為1.8-2.0，濃度≥100 ng/μL，體積≥20μL，干冰運輸。

f.cDNA：cDNA原液≥20 μL，干冰運輸。

 2. 樣品保存及運輸

加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1～2天，2天以后部分組織中的RNA會開始降解。室溫（25℃）穩(wěn)定保存1周，不會有明顯的RNA降解發(fā)生。大部分樣品置于RNAsolidTM試劑中，4℃條件下可穩(wěn)定保存1個月，不會有明顯的RNA降解發(fā)生。長期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過夜，然后將RNAsolidTM試劑吸出棄去，再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩(wěn)定保存3～5年。

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