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很多科研工作者都會(huì)使用人類樣本進(jìn)行科學(xué)研究,樣本因獲取不易而珍貴無比。珍惜人類樣本,需從樣本處理開始。以下的一些樣本處理技巧,或許可以幫助您,消除實(shí)驗(yàn)中的干擾物質(zhì)。
一:多次磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌
磷酸鹽緩沖液(PBS)幾乎深得所分子生物學(xué)家的喜愛,因?yàn)镻BS通常不會(huì)裂解或損壞細(xì)胞,同時(shí)允許重復(fù)洗滌。
如何使用:如果你想要的組織被覆蓋在血液中,用30-40mL冷PBS洗滌并輕輕搖動(dòng)。將剩余的大部分組織轉(zhuǎn)移到新的EP管中,用于后續(xù)洗滌(每次洗滌都將增加細(xì)胞得產(chǎn)量)。幾次洗滌后,較大的組織將沒有血液和基質(zhì)細(xì)胞。如果您想捕獲非粘連組織或細(xì)胞,請(qǐng)記住保存并離心用于洗滌的每個(gè)PBS管。
注意:使用PBS洗滌zui適用于上皮細(xì)胞的分離。洗滌也可以用來溫和地去除粘附在您感興趣的組織上的基質(zhì)細(xì)胞。
二:通過預(yù)包被板分離目標(biāo)細(xì)胞
不同的細(xì)胞對(duì)胞外基質(zhì)蛋白或類似化合物具有不同的親和力。由于不同的粘附力,您可以快速,輕松將細(xì)胞系和預(yù)包被板共孵育,去除未結(jié)合細(xì)胞,從而分離目標(biāo)細(xì)胞。膠原蛋白(用于上皮細(xì)胞)或多聚賴氨酸(用于多種細(xì)胞類型)就是很好的預(yù)包被材料。
注意:您需要事先評(píng)估目標(biāo)細(xì)胞是否與底物相互作用(例如,一些細(xì)胞系能優(yōu)先附著多聚賴氨酸,因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生指向多聚賴氨酸的蛋白酶)。
三:利用特異性染色檢查細(xì)胞純度
您可以使用高度特異性標(biāo)記物,如上皮細(xì)胞標(biāo)記物—E-鈣粘蛋白或其他細(xì)胞類型來檢查細(xì)胞純度。一旦細(xì)胞群以上述方式大規(guī)模純化后,再通過常規(guī)染色方法驗(yàn)證小的亞群。您可以通過顯微鏡或使用可用肉眼看到的顯色底物來觀察情況。