操作elisa試劑盒，說(shuō)簡(jiǎn)單又簡(jiǎn)單，說(shuō)復(fù)雜又復(fù)雜。雖然很多步驟都是由機(jī)器完成，但是還有例如加樣，洗板，甩板等需要手工完成的工作。哪一步對(duì)你來(lái)說(shuō)，又愛(ài)又恨，咬牙切齒呢？

ELISA測(cè)定現(xiàn)通常為采用手工操縱的以微孔板條為固相的測(cè)定模式，測(cè)定操縱非常簡(jiǎn)單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑預(yù)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判定和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。

    加血清樣本及反應(yīng)試劑

    在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，血清樣本的加進(jìn)幾乎是惟一的要使用微量加樣器加進(jìn)樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須留意的關(guān)鍵點(diǎn)是，加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的正確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加進(jìn)在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很輕易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孑L之間的現(xiàn)象，這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色。所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性，下次測(cè)定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。

    溫育

    溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。zui為常用的溫育溫度有37~C和室溫，其次是43~C和2～8~C。

    溫育這一步是ELISA測(cè)定中zui輕易出現(xiàn)題目的步驟。目前國(guó)內(nèi)通常ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 0．5～lh，進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1～2h。一般來(lái)說(shuō)抗原抗體反應(yīng)在37℃下需要1～2h才能有較*的結(jié)合，低于1h，可能會(huì)影響測(cè)定下限。