芽孢染色法的操作原理

芽孢是芽孢桿菌屬和梭菌屬生長到一定階段形成的一種抗逆性很強的休眠體結(jié)構(gòu)，通常為圓形或橢圓形。
 

芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難。因此，用著色力強的染色劑（如孔雀石綠）在加熱條件下進行染色時，染料不僅可以進入菌體，而且也可以進入芽孢，進入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進入芽孢的染色的染料則難以透出，若再用復(fù)染液（如沙黃水溶液）染色后，芽孢仍然保留初染劑的顏色，而菌體被染成復(fù)染劑的顏色，即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易于區(qū)分。

部分細菌能產(chǎn)生內(nèi)孢子，這些孢子能抵制細菌染色液的進入，在微生物檢測革蘭氏染色法涂片染色時，革蘭氏陽性菌的芽孢呈現(xiàn)無色。雖然芽孢在革蘭氏染色片中可以看到，但在不易清晰觀察時，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢與菌體呈現(xiàn)不同顏色，便于觀察。主要的芽孢染色法有孔雀綠染色法和石碳酸復(fù)紅染色法。

孔雀綠染色法的具體步驟：首先將生有芽孢的斜面菌苔按革蘭氏染色法涂片后，用飽和孔雀綠水溶液染色10min，然后用自來水沖洗，沖洗完后用0.5%蕃紅液復(fù)染30s，用水洗，吸干，即可鏡檢，鏡檢時芽孢呈綠色，菌體和芽孢囊呈微紅色。

石碳酸蕃紅染色法具體步驟：首先按常規(guī)涂片，然后滴加石碳酸復(fù)紅于涂片上，并于玻片下緩緩加熱，使染液冒蒸汽但不沸騰，并繼續(xù)滴加染液，不使涂片上染液蒸干，這樣保持5min。帶涂片冷卻后，傾去染液，用酸性乙醇脫色指無紅色染劑洗脫為止，接著*水洗，洗后用呂氏美藍復(fù)染2-3min，水洗吸干后即可進行鏡檢，鏡檢時菌體計孢囊呈藍色，芽孢呈紅色。